订购热线:15800465385
搜索
技术文献

夹心法ELISA检测人α2a,α2b干扰素(α2a,α2b)

阅读次数:1338    发布时间:2017/4/6 15:16:41

夹心法ELISA检测人α2a,α2b干扰素(α2a,α2b)

重组人α2a/α2b干扰素(rHuIFN-α2arHuIFN-α2b)生产流程中不可缺少的一环是产品的质量监控,通常采用的是HEp-2/VSVWish/VSV系统检测干扰素的生物活性。此系统常由于VSV或细胞的影响而不够稳定,且检测周期较长。我们用自制的2种针对rHuIFN-α2arHuIFN-α2b的单克隆抗体(McAb)建立了定量检测rHuIFN-α2arHuIFN-α2b的双McAb夹心ELISA,敏感性达60pg/ml,结果与生物学活性检测相对应。试用于rHuIFN-α2a生产中的质量控制取得了满意的结果。此试剂盒也能检测人体产生的天然α干扰素,有用于基础和临床疾病研究的潜力。

  一、原理:选用2种针对rHuIFN-α2arHuIFN-α2b分子不同表位的McAb1McAb作为包被抗体,另1McAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为结合物,催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线,在标准曲线上查出待检标本的含量。

  二、试剂盒提供试剂(供检测22份标本)

  1. 包被抗体:应用时用0.05M,pH9..6碳酸盐缓冲液作100倍稀释。

  2. 酶标抗体:应用时用0.1BSA-PBS200倍稀释(售出前已稀释10)

  3. 标准品:rHuIFN-α2a(3ng/ml),用时用0.1BSA-PBS作倍比稀释。

  4. ABTS底物:ABTS 1mg0.1M,pH5.0柠檬酸缓冲液 2ml+3HO4μl(临用时配)

  三、自备试剂和材料

  1. 进口96孔或国产40孔聚苯乙烯elisa(敏感性以进口板稍好)

  2. 0.1M,pH7.4 PBS配其它液体用。

  3. 包被缓冲液:0.05M,pH9.6 NaCO-NaHCO3缓冲液。

  4. 洗涤液:0.05Tween 20-PBS

  5. 结合物稀释液:0.1BSA-PBS(用于稀释标本、标准品和结合物)

  6. 底物缓冲液:0.1M,pH5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。

  7. ELISA读数仪等。

 

  四、操作步骤

   向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100μl/

                42448h

    洗3次,加入10倍连续稀释的待测标本

    (4个稀释度即可)或倍比稀释的标准品(6个稀释度) 100μl/

                37,1h

     3次,加入稀释好的酶标抗体100μl/

                37,45min

    洗4次,加入配好的ABTS底物液 100μl/

                RT,30min

             测410nm OD

                

             绘标准曲线

 

五、注意事项:

  1. 待检标本必须无污染,无溶血。

  2. 标本稀释后加入ELISA板时,注意从低浓度向高浓度依次加入。

  3. 结合物稀释液和底物缓冲液中禁止加入叠氮钠。

原创作者:上海双赢生物科技有限公司

相关产品

公司首页| 公司简介| 产品展示| 公司新闻| 技术文献| 资料下载| 采购咨询| 联系我们| 销售网络

地址:上海 电话:15800465385 传真: 邮箱:通过本站在线发送邮件给展商   ICP备案号:沪ICP备15013014号-3

Copyright@2014-2017 上海双赢生物科技有限公司 All rights reserverd   技术支持:阿仪网   管理登录

10

阿仪网推荐收藏该企业网站